8th Cuban Congress on Microbiology and Parasitology, 5th National Congress on Tropical Medicine and 5th International Symposium on HIV/aids infection in Cuba

Title

IMPLEMENTACIÓN DE UN MÉTODO DE DETECCIÓN DE ADN DE GIARDIA A PARTIR DE MATERIA FECAL FORMOLADA MEDIANTE PCR CONVENCIONAL

Authors

Adriana Arevalo Jamaica

Abstract


Adriana, Arévalo1;María Luz, Gunturiz2; Sofía Duque1

Instituto Nacional de Salud, Dirección de Investigación en Salud Pública, Subdirección de Investigación Científica y Tecnológica

Grupo Parasitología1

Grupo Fisiología Molecular2

aarevalo@ins.gov.co

 

Introducción/ Objetivos

La giardiasis es un problema de salud pública que afecta a millones de personas en especial a niños ocasionándoles problemas de crecimiento, malnutrición y cognitivos, especialmente en países con deficiencia sanitaria y asociadas a situaciones de pobreza.

El formol es comúnmente utilizado como preservante de parásitos intestinales garantizando su identificación en cualquier período de tiempo pos-preservación.

El objetivo del presente trabajo consistió en implementar un protocolo de extracción de ADN de Giardia a partir de materia fecal preservada en formol al 5% y su detección utilizando PCR convencional.

 

Materiales y Métodos

Se utilizaron muestras de materia fecal, preservadas en formol al 5%, del Banco de muestras del Instituto Nacional de Salud, las cuales tenían únicamente quistes de Giardia. Se purificaron los quistes mediante gradiente de sacarosa, se congelaron en nitrógeno líquido y se descongelaron en baño de maría a 60oC por tres veces consecutivas. Se extrajo ADN de Giardia usando el mini StoolQuiagen® siguiendo las instrucciones del instructivo. Se midió la concentración de ADN en nanodrop®, se realizó PCR convencional utilizando como iniciadores la β-giardina. 

 

Resultados

Se obtuvo una concentración de ADN de Giardia de 13.5ng/µl y posterior al PCR convencional se identificó una banda nítida de 264pb correspondiente a β-giardina característica de Giardia. 

 

Conclusiones

Estos resultados son promisorios dado que permitirán recolectar muestras de materia fecal de diferentes zonas del país preservadas en formol al 5% para realizar diagnóstico parasitológico, estudios de epidemiología molecular de la giardiasis, conocer la dinámica de la transmisión y posteriores medidas de control.

 

Referencia

Molina et al PCR amplification of triosephosphate isomerase gene of Giardialamblia in formalin-fixed feces. Rev LatinoamMicrobiol 2007; 49: 6-11.